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水稻中獨(dú)腳金內(nèi)酯的結(jié)構(gòu)鑒定方法

 獨(dú)腳金內(nèi)酯(Strigolactones,SLs)是一種新近研討發(fā)現(xiàn)的按捺植物分枝的新式植物激素。水稻是世界上重要的糧食作物,為世界上一半以上的人口供給首要食物,因而水稻產(chǎn)值直接影響各國(guó)的糧食安全,而分蘗是決議水稻產(chǎn)值的重要因素之一。因而對(duì)水稻中已知或不知道的SLs進(jìn)行結(jié)構(gòu)判定,探求環(huán)境營(yíng)養(yǎng)狀況(如磷鉗制)對(duì)SLs組成和排泄,以及水稻分蘗的影響,以期在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上為經(jīng)過(guò)SLs來(lái)調(diào)控水稻合理株型,進(jìn)步水稻產(chǎn)值的應(yīng)用供給理論依據(jù)。 本試驗(yàn)以粳型慣例稻日本晴、SLs組成缺少型突變體d10和SLs不靈敏型突變體d14為資料,經(jīng)過(guò)高分辯質(zhì)譜對(duì)水稻中內(nèi)源SLs進(jìn)行結(jié)構(gòu)判定,建立了一種液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法對(duì)水稻中SLs的檢測(cè)辦法,并使用此辦法對(duì)水稻中獨(dú)腳金內(nèi)酯在磷鉗制應(yīng)用上的規(guī)則進(jìn)行驗(yàn)證。

成果如下:

1、在水稻根和根排泄物中判定出了一種SLs,5-脫氧獨(dú)角金醇。首要經(jīng)過(guò)TSQ Quantum液質(zhì)聯(lián)用儀對(duì)水稻中SLs及其衍生物進(jìn)行開(kāi)始挑選,得出10個(gè)能產(chǎn)生SLs一起結(jié)構(gòu)D環(huán)對(duì)應(yīng)的特征離子m/z=97的剖析物m/z=266,282,294,298,315,317,331,347,352,405。因而開(kāi)始以為這10個(gè)剖析物可能是SLs。然后經(jīng)過(guò)LTQ-Orbitrap高分辯質(zhì)譜對(duì)這10個(gè)剖析物進(jìn)行結(jié)構(gòu)判定。先對(duì)水稻根和根排泄物進(jìn)行全掃描及相關(guān)剖析,成果得出這10個(gè)離子中只要m/z=331剖析物為獨(dú)腳金內(nèi)酯或其衍生物此剖析物,并判定出了剖析物的分子結(jié)構(gòu)。再對(duì)水稻根和根排泄物樣品進(jìn)行m/z=331的子離子掃描,依據(jù)子離子m/z=97結(jié)構(gòu)信息對(duì)全掃描得到的m/z=331剖析物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行進(jìn)一步確證,也進(jìn)一步證明此化合物為獨(dú)腳金內(nèi)酯。依據(jù)文獻(xiàn)資料,咱們?cè)谒靖透判刮镏信卸ǔ龅莫?dú)腳金內(nèi)酯為5-脫氧獨(dú)腳金醇。

2、建立了水稻中SLs的HPLC-MS/MS檢測(cè)辦法。優(yōu)化并斷定了佳的質(zhì)譜和色譜檢測(cè)條件,試驗(yàn)終斷定在正離子模式下對(duì)剖析物進(jìn)行監(jiān)測(cè),選用水溶液-乙腈進(jìn)行二元梯度洗脫。一起還研討了水稻根、莖和根排泄物中SLs的前處理辦法,研討標(biāo)明,乙腈水溶液對(duì)水稻根、莖樣品中SLs的提取作用好,再經(jīng)過(guò)Florisil固相萃取柱凈化能夠有用消除基質(zhì)效應(yīng);水稻根排泄物中的SLs經(jīng)過(guò)Plexa固相萃取柱-Florisil固相萃取柱接連凈化法能夠減小基質(zhì)效應(yīng),取得較好的峰形和較高的回收率。對(duì)建立的此檢測(cè)辦法進(jìn)行點(diǎn)評(píng),剖析物GR24在0.5~1000μg/L濃度范圍內(nèi),線性杰出,相關(guān)系數(shù)為0.9972;在根、莖樣品2μg/kg、4μg/kg和8μg/kg添標(biāo)水平,及根排泄物樣品0.01μg/L、0.02μg/L和0.04μg/L添標(biāo)標(biāo)水平下,均勻回收率在80%-102%之間,RSD%小于7.2%;水稻根、莖和根排泄物中GR24的辦法檢出限(S/N≥3)別離為為20pg/g、50pg/g和0.5ng/L。在以GR24為研討對(duì)象建立的檢測(cè)辦法的基礎(chǔ)上,挑選判定出5-脫氧獨(dú)腳金醇的另一個(gè)子離子,將它和特征離子別離作為定性離子和定量離子,建立了水稻中SLs的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜的檢測(cè)辦法。

3、對(duì)水稻中SLs的功用和SLs在磷鉗制應(yīng)用上的規(guī)則進(jìn)行了驗(yàn)證。經(jīng)過(guò)對(duì)三個(gè)品種進(jìn)行外施1μmol/L GR24的處理試驗(yàn),充沛證明了SLs有按捺水稻分蘗的功用,一起SLs信號(hào)傳遞對(duì)SLs功用的發(fā)揮是有必要。本研討磷鉗制試驗(yàn)下測(cè)得的水稻根和根排泄中5-脫氧獨(dú)腳金醇的含量及水稻分蘗數(shù)目的改變規(guī)則和Mikihisa Umehara等文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)的,對(duì)應(yīng)試驗(yàn)資料對(duì)應(yīng)目標(biāo)的改變規(guī)則完全符合,所以也就是驗(yàn)證了Mikihisa Umehara等的定論由缺磷(磷鉗制)引起的獨(dú)腳金內(nèi)酯水平的進(jìn)步有助于按捺水稻分蘗芽的成長(zhǎng)。
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